蚯蚓凍干機(jī)在藥材凍干機(jī)制備蚯蚓纖溶酶凍干粉的方法,！真空冷凍干燥技術(shù)簡(jiǎn)稱凍干技術(shù),，是一項(xiàng)對(duì)食品護(hù)色、保鮮,、保質(zhì)的高新加工技術(shù),。目前廣泛用于果蔬、肉禽,、水產(chǎn),、調(diào)味品、方便食品及名優(yōu)特產(chǎn)等干燥，可達(dá)到保持食品原有的色,、香,、味、形,、新鮮度不變的目的,，且復(fù)水性特好，成品便于貯存和運(yùn)輸,，費(fèi)用降低,，保存期延長(zhǎng)。在干燥蜂皇漿,、人參,、龜、鱉,、蚯蚓等營(yíng)養(yǎng)保健品,，采用真空冷凍干燥工藝，更使人們相信該營(yíng)養(yǎng)品純真自然,。

 

真空凍干機(jī)制備蚯蚓纖溶酶凍干粉的方法,，其特征在于，包括如下步驟：

    步驟一,、蚯蚓粗粉的制備：將活蚯蚓,，饑餓一天，自然吐凈泥沙,，洗滌,，而后在溫度介于2035℃的通風(fēng)條件干燥并制成粉碎，通過(guò)100200目篩制成蚯蚓粗粉,；

    步驟二,、粗酶溶液的制備：取蚯蚓粗粉用2倍體積的0.1mol/L，pH為7.8的磷酸緩沖液PBS勻漿,，加0.1mol/LNaCl溶液,，置于4℃冰箱內(nèi)過(guò)夜，然后以10000r/min,，4℃離心15min,，棄沉淀，取上清,；上清液于50℃水浴保溫40min,，流水冷卻，再8000r/min,，4℃離心10min,，取上清,，在上清液中加硫酸銨達(dá)30％飽和度，靜置3小時(shí),，再8000r/min,，4℃離心10min；收集上清液再加硫酸銨達(dá)70％飽和度,，靜置3小時(shí),，再8000r/min，4℃離心10min,，收集沉淀,；將沉淀溶于上述緩沖液中，對(duì)上述緩沖液以載留5KD分子量的透析袋透析過(guò)夜去鹽,，再將透析液8000r/min,，4℃離心10min，取上清液即為蚯蚓纖溶酶粗酶溶液,；

       步驟三,、粗酶的純化：將蚯蚓纖溶酶粗酶溶液過(guò)Sephadex G75凝膠層析，上柱前預(yù)先用0.02mol/L,，pH為7.8的磷酸緩沖液平衡,，上柱后用上述緩沖液洗脫至在280nm波長(zhǎng)無(wú)光吸收，洗脫液出現(xiàn)2個(gè)蛋白峰,，其中酶活性峰與第1個(gè)蛋白峰重疊,，收集重疊部分的酶液，過(guò)DEAECellulose A52離子交換柱,，過(guò)柱前先用0.05mol/L，pH為7.8的PBS平衡,；然后用含00.5mol/L NaCl的PBS離子強(qiáng)度線性梯度洗脫,，洗脫液出現(xiàn)3個(gè)蛋白峰，酶活性峰與蛋白峰第3峰重疊,，其余2個(gè)蛋白峰基本無(wú)酶活性,，收集活性部分即為蚯蚓纖溶酶純酶；

     步驟四,、蚯蚓纖溶酶的修飾：加入蚯蚓纖溶酶純酶和活化的PEG到15mL,，pH9.2，0.1mol/L的硼酸緩沖液中,，純酶與PEG的重量比是1:50,，在30℃下，保溫反應(yīng)1小時(shí),，反應(yīng)物對(duì)0.1mol/L,，pH7.3的磷酸緩沖液透析過(guò)夜，透析液再以10000r/min，4℃離心l0min,， 取上清液過(guò)柱Sephadex G75,，收集活性成分，即為蚯蚓纖溶酶修飾酶,；

 

步驟五,、蚯蚓纖溶酶凍干粉的制備：將蚯蚓纖溶酶修飾酶裝在樣品盤(pán)里，料厚不超過(guò)8mm,，放進(jìn)真空冷凍干燥機(jī)設(shè)備干燥室內(nèi)進(jìn)行凍干,，于-35℃冷凍12小時(shí)，然后在5pa的真空度下,，升溫至30℃,，干燥12小時(shí)；繼續(xù)升溫至40℃,，真空干燥14小時(shí),，得到蚯蚓纖溶酶修飾酶的凍干粉，其含水量為7.0%,，蛋白含量為68%,，酶活力為1700U/mg。