蚯蚓凍干機在藥材凍干機制備蚯蚓纖溶酶凍干粉的方法,！真空冷凍干燥技術簡稱凍干技術，是一項對食品護色,、保鮮,、保質(zhì)的高新加工技術。目前廣泛用于果蔬,、肉禽,、水產(chǎn)、調(diào)味品,、方便食品及名優(yōu)特產(chǎn)等干燥,，可達到保持食品原有的色、香,、味,、形、新鮮度不變的目的,，且復水性特好,，成品便于貯存和運輸，費用降低,，保存期延長,。在干燥蜂皇漿,、人參、龜,、鱉,、蚯蚓等營養(yǎng)保健品，采用真空冷凍干燥工藝,，更使人們相信該營養(yǎng)品純真自然,。
真空凍干機制備蚯蚓纖溶酶凍干粉的方法，其特征在于,，包括如下步驟：
步驟一、蚯蚓粗粉的制備：將活蚯蚓,，饑餓一天,，自然吐凈泥沙，洗滌,，而后在溫度介于2035℃的通風條件干燥并制成粉碎,，通過100200目篩制成蚯蚓粗粉；
步驟二,、粗酶溶液的制備：取蚯蚓粗粉用2倍體積的0.1mol/L,，pH為7.8的磷酸緩沖液PBS勻漿，加0.1mol/LNaCl溶液,，置于4℃冰箱內(nèi)過夜,，然后以10000r/min，4℃離心15min,，棄沉淀,，取上清；上清液于50℃水浴保溫40min,，流水冷卻,，再8000r/min，4℃離心10min,，取上清,，在上清液中加硫酸銨達30%飽和度，靜置3小時,，再8000r/min,，4℃離心10min；收集上清液再加硫酸銨達70%飽和度,，靜置3小時,，再8000r/min，4℃離心10min,，收集沉淀,；將沉淀溶于上述緩沖液中,，對上述緩沖液以載留5KD分子量的透析袋透析過夜去鹽，再將透析液8000r/min,，4℃離心10min,，取上清液即為蚯蚓纖溶酶粗酶溶液；
步驟三,、粗酶的純化：將蚯蚓纖溶酶粗酶溶液過Sephadex G75凝膠層析,，上柱前預先用0.02mol/L，pH為7.8的磷酸緩沖液平衡,，上柱后用上述緩沖液洗脫至在280nm波長無光吸收,，洗脫液出現(xiàn)2個蛋白峰，其中酶活性峰與第1個蛋白峰重疊,，收集重疊部分的酶液,，過DEAECellulose A52離子交換柱，過柱前先用0.05mol/L,，pH為7.8的PBS平衡,；然后用含00.5mol/L NaCl的PBS離子強度線性梯度洗脫，洗脫液出現(xiàn)3個蛋白峰,，酶活性峰與蛋白峰第3峰重疊,，其余2個蛋白峰基本無酶活性，收集活性部分即為蚯蚓纖溶酶純酶,；
步驟四,、蚯蚓纖溶酶的修飾：加入蚯蚓纖溶酶純酶和活化的PEG到15mL，pH9.2,，0.1mol/L的硼酸緩沖液中,，純酶與PEG的重量比是1:50，在30℃下,，保溫反應1小時,，反應物對0.1mol/L，pH7.3的磷酸緩沖液透析過夜,，透析液再以10000r/min,，4℃離心l0min， 取上清液過柱Sephadex G75,，收集活性成分,，即為蚯蚓纖溶酶修飾酶；
步驟五,、蚯蚓纖溶酶凍干粉的制備：將蚯蚓纖溶酶修飾酶裝在樣品盤里,，料厚不超過8mm，放進真空冷凍干燥機設備干燥室內(nèi)進行凍干,，于-35℃冷凍12小時,，然后在5pa的真空度下,，升溫至30℃，干燥12小時,；繼續(xù)升溫至40℃,，真空干燥14小時，得到蚯蚓纖溶酶修飾酶的凍干粉,，其含水量為7.0%,，蛋白含量為68%，酶活力為1700U/mg,。
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